ПЦР 19 20 21 22 инфекции

  • Оглавление
  • Что такое антитела к коронавирусу?
  • Методы определения антител к коронавирусу
  • Что выбрать – качественный или полуколичественный анализ?
  • Показания к проведению исследования
  • Как проводится тест
  • Расшифровка результатов теста на антитела к коронавирусу
  • Ig G – расшифровка анализа на антитела к коронавирусу
  • BAU/мл – новая расшифровка анализа на антитела к коронавирусу

Что такое антитела к коронавирусу?

Антитела (другое название – иммуноглобулины) – это специальные белки, которые вырабатываются и (или) продуцируются плазматическими клетками.

ПЦР 19 20 21 22 инфекции

Что делают иммуноглобулины?

Иммуноглобулины образуются в ответ на попадание в организм чужеродных бактерий или вирусов. Они взаимодействуют с антигеном (специфическим участком вредителя) и обезвреживают его.

Таким образом наш иммунитет стоит на страже нашего здоровья.

Какие классы иммуноглобулинов существует?

Выделяют 5 классов иммуноглобулинов, некоторые из которых содержат подклассы.

IgA – секретируются на поверхности эпителия и присутствуют в слюне, слезе, на поверхности слизистых.

IgM – обнаруживается при первичном попадании антигена. Указывает на острый инфекционный процесс у человека.

IgG – основной класс иммуноглобулинов, защищающий от вирусов, бактерий, токсинов.

IgD – обнаруживают на поверхности развивающихся B-лимфоцитов. Функция не установлена.

IgE – секретируются при аллергической реакции немедленного типа.

Методы определения антител к коронавирусу

ПЦР 19 20 21 22 инфекции

Существуют два метода определения иммуноглобулинов к коронавирусу в организме человека – ИФА и ИХА.

Иммуннохроматографический анализ – это качественный метод определения иммуноглобулинов классов М и G.

Качественный метод – это метод, позволяющий только определить наличие антител в организме. Иными словами, ответить на вопрос – есть они или нет.

  1. Иммуноферментный анализ – это количественный метод определения иммуноглобулинов.
  2. Количественный метол – не просто говорит о наличии антител, но и показывает их количество в единице объема крови.
  3. Для анализов проводят забор венозной крови, следовательно, подготовка к процедуре стандартная:
  1. Проводить исследование на пустой желудок (не есть за 8 часов до процедуры).

  2. Воздержаться от питья воды за час до забора крови.

  3. Для курильщиков – не курить за 2 часа до процедуры.

Что выбрать – качественный или полуколичественный анализ?

Для чего проводится качественный и количественный анализ?

Качественный анализ позволяет ответ на 2 вопроса:

  1. Болел или нет?

  2. Как давно болел?

Полуколичественный тест позволяет ответить на эти вопросы, а также определить количество иммуноглобулинов в организме.

Для чего определять количество иммуноглобулинов?

Определение количества антител позволяет определить, сформирован ли долговременный иммунитет. Именно он защищает на организм от повторного заболевания коронавирусом.

ПЦР 19 20 21 22 инфекции

Показания к проведению исследования

Показаниями к проведению анализа является:

  1. Наличие симптомов общего недомогания. В этом случае тестирование проводится для подтверждения диагноза.

  2. При контакте с носителем или больным коронавирусной инфекцией.

  3. По желанию – для лабораторной оценке иммунного статуса.

Как проводится тест

ПЦР 19 20 21 22 инфекции

  1. Необходимо прийти в Клинику МЕДЕЛ по предварительной записи.

  2. Процедура проводится путем забора крови.

  3. В Клинике МЕДЕЛ результаты изготавливаются в течение 1 дня.

Расшифровка результатов теста на антитела к коронавирусу 

Как расшифровать качественный тест на антитела к коронавирусу

Есть/Нет Ig G (Есть) Ig G (Нет)
Ig M (Есть) 1 вариант     2 вариант 
С момента заражения прошло 5-10 недель. В крови еще присутствуют IgM, но уже образуются IgG  Острая фаза заболевания. С момента заражения  прошло 1-3 недели
Ig M (Нет) 3 вариант      4 вариант
      С момента болезни прошло несколько месяцев. Вы могли перенести заболевание в бессимптомной форме Вы не сталкивались с вирусов или с момента заражения прошло не более 7-ми дней
  • Антитела к коронавирусу – таблица с расшифровкой результатов
  • Во 2-м и 4-м варианте (при наличии подозрительных симптомов) рекомендуется сдать ПЦР тест на коронавирус для выявления вредителя.
  • Полное отсутствие иммуноглобулинов может также означать, что:
  • 1)     Не были соблюдены условия подготовки и результат искажен
  • 2)     Симптомы гриппа или ОРВИ были похожи на симптомы коронавируса,
  • 3)     Пациент перенес заболевание в легкой форме, и антитела не выработались.
  • 4)     Пациент перенес заболевание в тяжелой форме, и антитела быстро исчезли. 

Ig G – расшифровка анализа на антитела к коронавирусу

Для определения иммуноглобулинов класса G в крови используют качественный и количественный метод определения антител. Ниже представлена таблица с расшифровкой иммуноферментного анализа на коронавирус (показатель igG при коронавирусе).

Индекс антител к коронавирусу – расшифровка титров

Результат Индекс Значение 
Отрицательный Меньше   0,8 Пациент либо не сталкивался с заболеванием, либо проходил процедуру в острой фазе.
Пограничный 0,8-1,1 Нужно сделать повторный тест через 14 дней. Возможно, тест был сделан в начале заболевания или в процессе выздоровления.
    Положительный  Больше 1,1 Данный уровень антител к коронавирусу у взрослых является нормой. Человек переболел  коронавирусной инфекцией несколько месяцев назад, и гуморальный иммунитет успел сформироваться.

   Антитела класса G к коронавирусу – расшифровка результатов

1 800 титр антител к коронавирусу (положительный результат) является нормой. При этом иммуноглобулины класса A и M в крови должны отсутствовать. Их наличие свидетельствует о стадии выздоровления. 

ПЦР 19 20 21 22 инфекции

BAU/мл – новая расшифровка анализа на антитела к коронавирусу

Всемирная Организация Здравоохранения утвердила новый международный стандарт для определения иммуноглобулинов к коронавирусу, с единицей измерения BAU (переводится как «коэффициент связывающих антител»).

Расшифровка количественного анализа на антитела к коронавирусу

Лабораторная диагностикауровня защиты иммунитета от коронавируса проводится при исследовании иммуноглобулинов к S-белку вируса. Для облегчения интерпретация результатов исследования было предложено использовать универсальную систему измерения.

Таблица пересчета результатов анализов на антитела от разных производителей в BAU/мл

Производитель   Коэффициент    пересчета в BAU/мл  
   Abbott ARCHITECT    0,142
Roche 1

Расшифровка количественного анализа на антитела к коронавирусу

BAU/мл Результат Значение
0-10 Отрицательный       Антител нет, требуется вакцинация
11-79 Отрицательный    Антител мало, принятие решения о вакцинации    
80-149,9 Пограничный       Среднее количество антител
  150 и более    Положительный Вакцинация не требуется
500 и более    Положительный    Вакцинация не требуется

 BAU/мл – расшифровка анализа на антитела к коронавирусу

  1. Сделать тест на коронавирус, быстро, безопасно и точно, вы можете в Клинике МЕДЕЛ. 
  2. Для записи позвоните по номеру 
  3. 8 (843) 207-18-00.
  4. ПЦР 19 20 21 22 инфекции

Расшифровка анализа на ВПЧ: интерпретация результатов анализов. Вероятный диагноз | Университетская клиника

Расшифровка результатов ПЦР-анализа на папилломавирус, Digene-теста и их разновидностей не отличаются, поскольку количество микроорганизмов и их тип не зависит от метода обнаружения.

Готовый анализ на ВПЧ выглядит в виде бланка, на котором указываются:

  • Дата исследования. Она очень важна, поскольку концентрация ВПЧ часто оценивается в динамике. В этом случае самым важным фактором является рост концентрации вируса. Быстрое увеличение уровня ВПЧ гораздо опаснее слегка его повышенной концентрации, сохраняющейся в течение длительного времени. Поэтому результаты анализа надо сохранить.
  • Номер пробирки, присваиваемый каждому образцу, поступающему в лабораторию.
  • ФИО пациента и его пол.
  • Данные врача и лаборатории, проводившей исследование.

Результат анализа выдается в виде таблицы, где указывается абсолютная и относительная концентрация каждого из вирусов и общая вирусная нагрузка. В нём обязательно указывается концентрация вирусов штаммов 16, 18 и 31, чаще всего вызывающих рак шейки матки, и остальных, которые предусмотрены данным методом исследования.

Пример бланка с результатами анализов на папилломавирус

Бланк анализа на ВПЧ

Абсолютная вирусная нагрузка – это количество вируса обнаруженного в образце.

Если ВПЧ отсутствует или его концентрация не превышает клинически значимую, в бланке ставится пометка «вирус отсутствует» или «не обнаружен». Такая запись не означает, что возбудителя вообще нет в организме.

Это маловероятно, поскольку папилломавирус встречается у 80% населения. Просто его концентрация недостаточна для развития рака шейки матки и других заболеваний.

Если абсолютное содержание ВПЧ превышает клинически значимое, напротив штамма вируса указывается его концентрация (вирусная нагрузка). Чем она выше, чем хуже результат.

Абсолютная вирусная нагрузка ВПЧ при поражениях шейки матки разной тяжести, копий/мл (геном-эквивалентов на 105 клеток эпителия человека). Таблица результатов

Вирусная нагрузка Поражение шейки матки Показатель Lg (абсолютных копий) ВПЧ/10 5 клеток
Клинически малозначимая от 103 до 105 < 3
Умеренная 105–107 3 – 5
Высокая Более 107 Более 5

Чем выше концентрация вирусов в мазке, тем существеннее риск возникновения болезней вызываемых папилломавирусом – злокачественных опухолей, бородавок, кондилом, папиллом, папилломатоза дыхательных путей.

В бланке указывается показатель КВМ – контроль взятия материала, характеризующий его качество. Нормальный показатель КВМ должен быть не менее 4. Его уменьшение говорит о нехватке нормального объема ДНК, необходимого для проведения исследования. При низком КВМ проводится повторное взятие материала.

Относительная нагрузка – отношение вирусной нагрузки к КВМ. Результат расшифровки показателя таблицы

Относительная нагрузка Расшифровка
«Не выявлено». Вирус в организме не обнаружен или его концентрация невелика
Отрицательный показатель Количество вирусов гораздо меньше числа здоровых клеток. Возбудитель находится в «спящем» состоянии или его концентрация снижается
Положительный показатель Распространение инфекции или ее рецидив (возврат) после лечения. Это плохой результат анализа ВПЧ

Общая вирусная нагрузка важна в случае, если имеется поражение несколькими возбудителями.

Для подсчета суммируют все имеющиеся вирусные показатели.

По расшифровке результатов анализа, в котором выявлены те или иные типы ВПЧ, можно выявить, какое именно заболевание грозит пациенту.

Читайте также:  Ринофлуимуцил при беременности на ранних и поздних сроках: инструкция по применению, показания, противопоказания, аналоги и отзывы

Таблица расшифровки анализа на ВПЧ с вероятным диагнозом

Заболевания Штамм ВПЧ
Различные типы бородавок – обычные (вульгарные), юношеские (плоские), подошвенные (шипицы) 1-4, 10, 26, 27 – 29, 49, 57
Бородавки мясников (крупные бородавчатые наросты на теле) 7
Верруциформная эпидермодисплазия – заболевание, сопровождающееся появлением грубых толстых наростов на лице, теле и конечностях, напоминающих кору дерева 2, 3, 5, 8-10-12, 14, 15, 18- 20, 36, 37, 46, 47, 50
Кондиломы (генитальные бородавки) 6, 11, 16, 18, 33, 39, 40, 42-43, 51-52 54-55, 57, 61-62, 64-67
Дисплазия и рак шейки матки. Злокачественные опухоли анального канала прямой кишки 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39-40, 42-43, 45, 50 – 52, 54-56 ,61- 62, 64, 66, 68
Эпителиальная гиперплазия – заболевание, сопровождающееся появлением наростов на коже 13, 32
Папилломатоз дыхательных путей – разрастание полипов в носоглотке и трахее 6,11,30
Злокачественные опухоли лёгких и шеи 2,6, 11, 16,18, 30

Как сделать интерпретацию результата анализов на ПЦР максимально точной

Для этого нужно сдать анализ с поверхности шейки матки на PAP-тест и пройти одно из ДНК исследований:

  • ДНК-диагностика выявит вирус, его концентрацию и тип. Однако с её помощью невозможно узнать, начал ли вирус атаковать ткани шейки матки и насколько сильно такое поражение. Вирусная нагрузка даёт только косвенные сведения, поскольку развитие рака и других болезней зависит от иммунитета, состояния организма, сопутствующих заболеваний, типа вируса и других факторов. Поэтому даже низкая вирусная нагрузка не даст гарантию, что у пациентки не разовьется злокачественное новообразование шейки матки.
  • PAP-тест выявит клетки, образующиеся при папилломавирусной инфекции. Это укажет на наличие вируса и факт его проникновения в ткани. Метод также покажет тяжесть поражения.

ПЦР 19 20 21 22 инфекцииПЦР 19 20 21 22 инфекции

Однако даже имея на руках результаты двух анализов, провести их интерпретацию самостоятельно практически невозможно.

Для этого нужно провести осмотр пациентки и сопоставить картину состояния шейки с результатами диагностики. Это под силу только опытному врачу-гинекологу с хорошим багажом знаний и специальной аппаратурой.

Поэтому, пытаясь самостоятельно расшифровать данные, можно пропустить опасное заболевание.

Для сдачи анализов на ВПЧ и их расшифровки нужно обратиться в Университетскую клинику.Здесь можно проверить состояние шейки матки с помощью видеокольпоскопа – прибора, позволяющего осмотреть ее поверхность вывести изображение на экран. Врачи клиники не только выявят наличие ВПЧ, но и проведут лечение вызванных им поражений-дисплазии, кондилом, папиллом.

Лечение проводится с помощью лазерных, радиоволновых, световых и других щадящих методов, минимальная травмирующих место удаления. После такой процедуры очень быстро восстанавливаются ткани, а на месте патологического очага не остаётся рубцов, стянутости и других остаточных явлений.

Вирусная нагрузка. Что это за показатель и как правильно его интерпретировать

Современные возможности ПЦР диагностики COVID-19 в лаборатории ДИЛА позволяют ответить на несколько действительно важных вопросов:

  • ЕСТЬ или НЕТ вирусные частицы в исследуемом материале путем выявления РНК вируса;
  • определить вирусную нагрузку (ВН) – какое количество вирусов находится в 1 мл биоматериала (в соскобе со слизистых носо- и ротоглотки).  

От показателя ВН (высокая, средняя, низкая) напрямую зависит заразность инфицированного человека для окружающих.

Интенсивнее всего вирус размножается за 1-3 дня до появления симптомов и в первые 5-7 дней после первых проявлений.

В этот период количество вирусов в 1 мл выделений из носоглотки может составлять сотни тысяч и миллионы частиц, что соответствует среднему и высокому показателю вирусной нагрузки и делает пациента максимально заразным для окружающих.

Затем количество вирусов, выделяемых человеком начинает снижаться. Обычно начиная с 7-10 дня от начала клинических проявлений человек перестает быть заразным, что соответствует снижению показателей вирусной нагрузки.

В этот период вирусная РНК в анализе еще может выявляться (ПЦР позитивный с низким уровнем ВН), однако большинство исследований показывает, что после 10 дня клинических проявлений вирус теряет свою способность к репликации (размножению), а значит, и способность заражать других людей.

Как определяется ВН и что значит показатель Сt*

Для условного определения ВН используют показатель «пороговый цикл», обозначенный в результате анализа как Сt (Сycle threshold).

Он показывает, какое количество циклов амплификации произошло до того момента, как количество РНК в образце увеличилось настолько, что стало доступным для того, чтоб прибор смог ее «увидеть». Иными словами, Сt –это и есть тот пороговый цикл, на котором обнаружен вирус.

Соответственно, чем больше вирусных частичек в образце, тем быстрее их выявит тест-система. С каждым циклом количество копий удваивается, а ПЦР в реальном времени, как правило, происходит в течение 40 циклов.

После каждого цикла оценивают наличие свечения (флюоресценции), исходящее от метки на определенных участках РНК возбудителя. Чем раньше и интенсивнее началось свечение (например, на Сt = 5), тем больше вирусов находится в биологическом материале. *Число Ct — условный показатель определения вирусной нагрузки

Как понимать полученный результат исследования

ПЦР 19 20 21 22 инфекции

Если значение Ct низкое (5-15), это говорит о том, что вирусная нагрузка высокая и вирус SARS COV-2 передает свою генетическую информацию и размножается очень активно, образуя новые вирусные РНК в большом количестве и тем заразнее человек.

Если вирусных частичек мало, для их выявления нужно большее количество циклов. Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35-40), тем меньше вирусных частиц находится в образце.

Результат ПЦР отрицательный в том случае, если РНК вируса выявить не удается даже при самом высоком пороговом цикле чувствительности прибора – более 40 циклов амплификации (Сt больше 40: РНК SARS COV-2 не выявлена).

Результат При наличии симптомов При отсутствии симптомов
Сt 5-27. Высокая ВН Человек болен COVID-19, высоко заразен для окружающих.   Рекомендуется:

  • обратиться к врачу для оценки состояния в комплексе с осмотром и данными других исследований;
  • для оценки рисков тяжелого течения, особенно при наличии сопутствующих заболеваний, провести «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19». Людина заражена COVID-19, високо заразна для оточуючих.
Людина заражена COVID-19, високо заразна для оточуючих. Рекомендуется:

  • обратиться к врачу для наблюдения за состоянием (симптомы могут появиться позже);
  • повторить ПЦР тест через 10-14 дней;
  • для определения иммунного ответа сдать тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
Сt 28-34. Средняя ВН Человек болен COVID-19, есть риск заражения окружающих. Рекомендуется:

  • обратиться к врачу для оценки состояния;
  • для оценки риска тяжелого течения, особенно при наличии сопутствующих заболеваний провести «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19».
Человек заражен COVID-19, есть риск заражения окружающих. Рекомендуется:

  • обратиться к врачу для наблюдения за состоянием (симптомы могут появиться позже);
  • повторить ПЦР тест через 10-14 дней;
  • для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
Ct 35-40. Низкая ВН Человек болен COVID-19, риск заражения окружающих сохраняется, но он вероятно низок. Возможно самое начало заболевания. Рекомендуется: Человек заражен COVID-19. Чаще всего это может быть в период выздоровления (выведения вируса). Рекомендуется (если был контакт с больным COVID-19):

  • повторить ПЦР тест через 5-7 дней;
  • для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
ПЦР отриц. Риск заражения окружающих отсутствует. Возможно:

  • человек инфицирован другим возбудителем ОРВИ;
  • вирус концентрируется не в носоглотке, а в тканях легких или кишечника;
  • повторное взятие мазка через короткий промежуток времени (день в день или через день) уменьшает количество биоматериала в образце и в свою очередь может приводить к отрицательным результатам.

Для уточнения диагноза рекомендуется:

Риск заражения окружающих отсутствует.

  • человек здоров или выздоровел. Тест на иммуноглобулины класса G поможет уточнить, переболели ли вы коронавирусной инфекцией раньше

Тест на імуноглобуліни класу G допоможе уточнити, чи перехворіли ви на коронавірусну інфекцію раніше.

При обнаружении любого из определяемых генов коронавируса результат теста является положительным, что означает присутствие вируса в организме.

Важно помнить, что клинические проявления заболевания могут отсутствовать при любом уровне вирусной нагрузки.

При положительном результате ПЦР с высоким уровнем вирусной нагрузки и отсутствии симптомов заболевания (бессимптомном течении) вы высоко заразны для окружающих, поскольку из носоглотки выделяется много вирусов при дыхании, разговоре.

Для контроля снижения заразности можно провести повторное ПЦР-тестирование с определением уровня вирусной нагрузки через 7-10 дней

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

  • Исследование урогенитального тракта методом ПЦР на ИППП ;

Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ, коронавирус COVID-19 и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.

  • тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;

Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике — для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ — вирусов папилломы человека; в пульмонологии — для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии — для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний — в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии — для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов. Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 — 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 — 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий.

Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 — 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 — 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись.

Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 — 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 — 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 — 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C.

Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований.

После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 — 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО  в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой — позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота — биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота — биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев — нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку.

РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка.

Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды — основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп.

Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу.

Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию — адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) — гуанин, цитозиновый (C) — цитозин, тиминовый (Т) — тимин, урациловый (U) — урацил.

В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов — A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа — A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК — рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. 

Литература

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9

Комплексные программы для сдачи анализов

КВАНТ-21 — исследование, которое проводится методом ПЦР в режиме «реального времени» и позволяет выявить 21 тип папилломавируса человека, наиболее значимых для врачей-клиницистов и пациентов.

Это ВПЧ низкого (6, 11, 44) и высокого онкогенного риска (16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82). Данный анализ позволяет определить количество вируса и идентифицирует его генотип.

Материал для исследования

Соскобы эпителиальных клеток из цервикального канала, с шейки матки, из уретры.  

Подготовка к анализу

За 24 часа до процедуры необходимо воздержаться от применения всех видов местных лекарственных форм (свечи, мази, спринцевания, контрацептивы и т.п.) и средств интимной гигиены, содержащих бактерицидные добавки. Перед взятием материала пациенту рекомендуется не мочиться в течение 1,5-2 часов.  

Интерпретация результатов

  • < 3 Lg (ВПЧ/105 клеток) - клинически малозначимая вирусная нагрузка,
  • от 3 Lg до 5 Lg (ВПЧ/105 клеток) — клинически значимая вирусная нагрузка, нельзя исключить дисплазию, существует риск развития дисплазии
  • > 5 Lg (ВПЧ/105 клеток) — клинически высокозначимая вирусная нагрузка, высокая вероятность наличия дисплазии

По онкогенной опасности для человека условно выделяют три группы типов папилломавирусов :

Группа Типы Заболевания
Неонкогенные папилломавирусы  1,2,3,4,7,10,28,41 подошвенные бородавки плоские бородавкивульгарные бородавки.
Онкогенные папилломавирусы низкого риска 5,6,7,8,11,12,14,15,17,19,20,21,22, 23,24,25,42,43,44 аногенитальные бородавки ларингеальный папилломатозбородавчатую эпидермоплазию.
Онкогенные папилломавирусы высокого риска 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59 и 68 бовеноидный папуллез интраэпителиальной неоплазии шейки матки.
  • Неонкогенные папилломавирусы никогда не вызывают озлокачествление вызыванного ими процесса
  • Онкогенные папилломавирусы низкого риска при определенных условиях (достаточно редко) могут вызвать озлокачествление вызыванного процесса.
  • Онкогенные папилломавирусы высокого онкогенного риска под влиянием различных факторов вызывают озлокачествление вызыванного ими процесса и являются доказанным этиологическим фактором цервикального рака.  

36 часов на ул.Ленина,17 и ул.Клубная,50

Удмуртская,268 и ул.Молодежной, 87
24 часа на ул.Удмуртская 265/1

в формате «СРОЧНО» 4 часа на ул.Удмуртская,265/1

доплата за срочность 50 рублей

Цена через интернет: 

Тестирование на коронавирус SARS-CoV-2: тест-системы и достоверность результатов

Своевременная и качественная диагностика – один из ключевых факторов в борьбе с COVID-19: диагностика необходима и для оценки общей эпидемиологической ситуации, и в случае принятия решения по каждому конкретному пациенту. По данным сайта стопкоронавирус.

рф на 12.05.2020 г. проведено более более 5,8  миллионов тестов на наличие нового коронавируса. Цифра огромная. Однако, насколько достоверны результаты? Появляется все больше историй о типичной картине COVID-19 при отрицательных анализах.

Почему так может происходить?

Какие тест-системы сейчас используются, каковы их достоинства и недостатки, и почему некоторые регионы страны переходят на диагностику с помощью компьютерной томографии разберемся в этой статье. Все это важно знать фармацевтическим работникам, чтобы быть в курсе текущих событий и грамотно отвечать на вопросы, которые клиенты неизбежно задают и будут задавать людям в белых халатах.

Сначала поговорим о ПЦР-тестах, которые специфически выявляют РНК вируса в пробах. 

Взятие пробы для ПЦР

Показано, что для выявления нового коронавируса подходят смывы из носоглотки – из ротоглотки вероятность ложноотрицательного анализа немного выше [1]. Один из важнейших аспектов – время взятия материала.

Проведенные исследования показывают, что при взятии материала у больного в первый день проявления симптомов COVID-19 положительный диагноз поставят с вероятностью 94 %, а вот к 10-му дню это будет всего лишь 67 %! [2].

Существует четкая закономерность: чем позже от возникновения симптомов взят материал, тем меньше шансов обнаружить в нем вирусную РНК.

Есть и хорошие новости: в течение первой недели от возникновения симптомов носоглоточные смывы имеют порядок от 100 000 до 1 000 000 копий вирусной РНК в 1 мл, что делает их легко обнаруживаемыми даже не самыми чувствительными системами. Исследования также показали, что вирусная нагрузка в верхних дыхательных путях может быть одинаковой у людей с проявленной симптоматикой и при бессимптомном течении болезни [3].

Транспортировка и хранение проб для ПЦР

Хранить образцы рекомендуется при температуре 2-8°C не больше 72 часов (более длительное хранение требует заморозки на -70°С и ниже) [4]. Соответственно, при нарушении температурного режима вероятность ложноотрицательного результата также повышается. Из-за перегруженности лабораторий, можно предположить, что большая часть образцов не хранится перед анализом надлежащим образом.

Точность разных ПЦР-тест-систем 

После попадания образцов в лабораторию правильность диагноза будет зависеть во многом от тест-системы, которую там используют. На сегодняшний день помимо двух тест-систем, разработанных еще в январе в ГНЦВБ «Вектор», зарегистрировано 8 ПЦР-тест систем [5]:

  •   АмплиТест SARS-CoV-2; разработан ФГБУ «Центр стратегического планирования» (ЦСП) Минздрава РФ, Москва;
  •   АмплиСенс CoVs-Bat-FL (ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва);
  •   Поливир SARS-CoV-2 (ООО «НПФ «Литех», Москва совместно с ФМБА и НИЦЭМ им. Гамалеи);
  •   РеалБест РНК SARS-CoV-2 (АО «Вектор-Бест», Новосибирск, Кольцово);
  •   набор реагентов для выявления РНК коронавирусов SARS-CoV-2 и подобных SARS-CoV (ООО «ДНК-Технология-ТС», Москва);
  •   набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 (ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России);
  •   SBT-DX-SARS-CoV-2 (ООО «Система-БиоТех»);
  •   набор ООО «МедипалТех» из Дубны (производителем указано ООО «Амплитек»).

Из них системы «Вектора» и «Вектор-Беста» (последняя через сеть лабораторий «Инвитро» [6]) используются для исследования проб от государственных медицинских организаций.

Здесь хочется отметить, что система «Вектора» не содержит в своем составе внутреннего контрольного образца, который должен добавляться во все пробы для контроля правильности выделения РНК и реакции обратной транскрипции [7]. Отсутствие такого контроля может также потенциально приводить к некоторому количеству ложноотрицательных результатов.

Хорошая новость заключается в том, что остальные зарегистрированные тест-системы имеют в своем составе внутренний контроль, а также, по-видимому, обладают более высокой чувствительностью, т.е. дают меньше ложноотрицательных результатов.

Что касается частных клиник, то компании «Хеликс» [8] и «Гемотест» [9] заявляют, что они используют систему ГНЦВБ «Вектор», в то время как CMD и «Ситилаб » используют более современные системы ЦНИИ Эпидемиологии и ДНК-технологии, соответственно [10, 11].

Таким образом, в городах, где представлены сетевые лаборатории, есть возможность сдать анализ частным образом и надеяться на точность проведения процедуры. В первые дни появления симптоматики точность будет выше.

Экспресс-системы

Что касается экспресс-тест-систем, то есть опасения, что созданные в сжатые сроки «уникальные» тесты по своему качеству будут уступать системам, основанным на обычной ПЦР.

Насколько надежны эти системы покажет время, однако уже сейчас количество ложноотрицательных результатов ПЦР в совокупности с длительностью ожидания результата привело к тому, что в клиниках страны диагноз стали ставить не на основе ПЦР-анализа, а на основе результатов компьютерной томографии (КТ).

КТ

Преимущество КТ-диагностики при наличии клинической картины – это  скорость постановки диагноза и более высокая чувствительность по сравнению с реальностью ПЦР-диагностики: 97,2 % против 83,3 % согласно данным небольшого китайского исследования [12].

Начиная с 4-5 дня заболевания можно различить так называемый симптом «матового стекла», на стадии прогрессирования такие участки  консолидируются,  возникает симптом «булыжной мостовой», «обратного ореола», а в пиковая стадии – «белое легкое» [13].

Возникает закономерный вопрос: отличается ли картина пневмонии, вызванной именно новым коронавирусом, от заболеваний другой вирусной природы. Ответ – нет. Вирусные пневмонии, будь то аденовирус, грипп или другие респираторные вирусы, выглядят на КТ одинаково.

Однако в условиях пандемии, когда подавляющее большинство вирусных пневмоний имеют коронавирусную природу, использование КТ для диагностики становится более чем оправданным.

В последней версии методических рекомендаций Минздрава по профилактике, диагностике и лечению COVID-19 указано, что «наличие клинических проявлений в сочетании с характерными изменениями в легких по данным КТ или обзорной рентгенографии органов грудной клетки вне зависимости от результатов однократного лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2 и эпидемиологического анамнеза» является клинически подтвержденным случаем COVID-19 [14]. Отметим также, что объем поражения легких при РГ и КТ может не иметь прямой корреляции с клинической тяжестью заболевания. 

ИФА (иммуноферментный анализ)

ПЦР-тест-системы, как и КТ-диагностика выявляет COVID-19 в острой фазе. Однако весьма актуальна и информация об уже переболевших, на основании которой можно судить об охвате населения заболеванием, а также о числе бессимптомных случаев. Ответы на эти, а также на многие другие вопросы, может дать тест-система на антитела.

На сегодняшний день разработкой таких тест-систем помимо «Вектора» занимаются такие организации как «Вектор-Бест», «НПО «Диагностические системы», ФНКЦ ФХМ ФМБА России, «МБС-Технологии», а также «Генетико» и Институт молекулярной биологии РАН [5].

К сожалению, тест-системы на антитела требуют намного больших усилий и времени на разработку, чем ПЦР-системы, а их чувствительность и специфичность оставляет желать лучшего. Так, проведенное в США исследование доступных система на антитела показало, что лишь 3 из 14 систем дают надежные результаты (т.е.

не более 1% ложноположительных результатов), но при этом их чувствительность не превышает 90% относительно положительных контрольных образцов [15]. Какова будет чувствительность и специфичность разрабатываемых российских систем – пока неизвестно.

Итак, самое разумное, что вы можете сказать клиентам:

  1. Если у вас первые пять дней симптомов – вполне можно сдать пробы для ПЦР-диагностики в частных центрах, в идеале, заказав выезд специалистов на дом. Желательно тестироваться в тех лабораториях, которые используют системы с контрольными образцами, о чем мы писали выше. 
  2. Если тест дал отрицательный результат или прошло больше пяти дней от начала болезни, а симптомы сохраняются, то в этом случае можно сделать КТ, при этом соблюдать все меры предосторожности, ведь в очереди запросто могут оказаться люди с новой коронавирусной инфекцией. 
  3. Проводить ИФА при текущей низкой точности – едва ли имеет смысл. 
  4. Если у вас нет симптомов, но был контакт, то можно пройти ПЦР-диагностику, но лучше всего на 14 дней уйти на самоизоляцию и наблюдать за самочувствием.
  • Регистрируйся на нашем сайте и получай доступ ко всем материалам о COVID-19 в специальном разделе.
  • Самое важное по теме: антисептик оптики для рук, гигиена рук, дезинфекция в аптеке, правила использования масок, мифы и факты о коронавирусе, фармконсултирование по жаропонижающим и гипотензивным во время пандемии. 

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *